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單層細胞系傳代培養指南

大多數細胞系和原代細胞培養物生長為單一厚度的細胞層（單層）或附著在玻璃或經過特殊處理的塑料基質上的薄片。為了保持培養物的健康和積極生長，通常需要定期對它們進行傳代培養。常見的傳代培養方法涉及通過使用蛋白水解酶（如胰蛋白酶或膠原酶）破壞細胞間和細胞與基質的連接。在細胞解離成主要由單細胞組成的懸浮液后，將它們稀釋并轉移到新的培養容器中。在那里它們可以重新附著并開始生長和分裂，經過一段時間的孵化后再次接近匯合。此時，它們可以再次進行傳代培養或用于實驗。以下指南描述了典型單層細胞培養...

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hTERT-成纖維細胞培養解決方案

hTERT成纖維細胞為永生化子宮內膜成纖維細胞(THESC)具有延長的壽命，并且在核型、形態和表型方面與原代親代細胞相似。在功能上，THESCs顯示激素治療后蛻膜化的生化終點。THESCs來源于從患有肌瘤的成年女性身上獲得的基質細胞。原代基質子宮內膜細胞通過用來自包裝細胞系pA317-hTERT的上清液感染而永生化，該細胞系表達hTERT和嘌呤霉素抗性基因。hTERT成纖維細胞培養方案如下：一、所需材料Dulbecco改良Eagle培養基(DMEM)/F12(Sigma,D2...

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CRISPR-Cas9基因編輯實驗中的注意事項

在細胞上做基因研究的一般的過程就是：利用CRISPR-Cas9先做基因除(GeneKnockout)，獲得基因敲除細胞系純合細胞：然后分析相關的生物學表型；最后做為對照還需要將原敲除的基因回補會到原細胞系中，做為對照細胞進行實驗對比。而利用Cas9進行細胞敲除之后，細胞回補實驗室要注意哪些問題?特別需要考慮的技術原理是那些？如何規劃好實驗流程，下面我們就一步步的進一下細胞其因敲除和回補實驗的效率/價格/周期等。一、敲除細胞的方式一般都是純合基因敲除細胞，當然也可以選擇MixC...

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細胞培養基pH值對細胞的影響

細胞培養基pH值對細胞的影響培養基是用來供給細胞營養，促使細胞增殖的，也是細胞賴以生長的環境。細胞培養實驗中用量最多的就是細胞培養基，雖然細胞培養試驗基本技術大同小異，但是每種細胞的培養條件卻相差甚遠。若偏離某種細胞所需的培養條件，則會導致細胞表達不同的表型。一、培養基體系主要成分及功能介紹1、葡萄糖：用于細胞能量代謝。2、CO?：細胞需要少量的二氧化碳來維持生長。在培養基中，溶解的CO?與碳酸氫鹽離子處于平衡狀態，許多培養基利用了這種CO?/碳酸氫鹽反應來緩沖培養基的pH值...

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菌種保存常用的五種方法

各種微生物由于遺傳特性不同，因此適合采用的保藏方法也不一樣。一種良好的有效保藏方法，首先應能保持原菌種的優良性狀長期不變，同時還須考慮方法的通用性、操作的簡便性和設備的普及性。下面介紹幾種常用的菌種保藏方法：1.斜面低溫保藏法將菌種接種在適宜的斜面培養基上，待菌種生長完成后，置于4℃左右的冰箱中保藏，每隔一定時間（保藏期）再轉接至新的斜面培養基上，生長后繼續保藏，如此連續不斷。此法廣泛適用于細菌、放線菌、酵母菌和霉菌等大多數微生物菌種的短期保藏及不宜用冷凍干燥保藏的菌種。放線...

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